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ELISA试剂盒洗液使用原则与洗涤方式的重要性
发布时间:2016-10-10   点击次数:1476次

ELISA试剂盒操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操编辑的高度重视,操编辑应严格按要求洗涤,不得马虎。
首先洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。
ELISA试剂盒洗涤液使用原则
1.某一项目的洗液建议使用该试剂盒内的洗液; 
2.同一elisa试剂盒洗液用完了,建议采用同一批号的洗液; 
3.同一批号的洗液也用完了,建议采用同一项目的试剂洗液; 
4.同一项目的洗液用完了,建议使用该项目其他厂家的洗液; 
5.同一项目所有厂家都用完了,建议采用同一系列项目的洗液(比如甲乙丙丁戊庚肝抗体检测,属于肝炎系列,急用时可以暂时混用); 
6.不建议国产洗液与进口洗液混用,也更不建议不同系列项目的洗液混用,这两点都是因为洗液的配置成分不同,特别是不同项目的洗液(正规试剂厂家),主要组分都不太一样。 
虽然对强阳性标本影响不是很大,但对于临界阳性阴性(灰区)标本影响较大,所以不提倡不同系列项目洗液混用。
ELISA试剂盒洗涤方式
(1)浸泡式 
a.吸干或甩干孔内反应液;
b.用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去);
c.浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
d.吸干孔内液体。吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干;
e.重复操作c和d,洗涤3-4次(或按说明规定)。在间接法中如本底较高,可增加洗涤次数或延长浸泡时间。
微量滴定板多采用浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的,非离子型洗涤剂既含疏水基团,也含亲水基团,其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合,从而削弱蛋白质与固相载体的结合,并借助于亲水基团和水分子的结合作用,使蛋白质回复到水溶液状态,从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20,其浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低试验的灵敏度。
(2)流水冲洗式 
流水冲洗法zui初用于小珠载体的洗涤,洗涤液仅为蒸馏水甚至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置,使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗,持续冲洗2分钟后,吸干液体,再用蒸馏水浸泡2分钟,吸干即可。浸泡式犹如盆浴,流水冲洗式则好比淋浴,其洗涤效果更为彻底,且也简便、快速。已有实验表明,流水冲洗式同样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压,让水流冲击板孔表面,洗涤效果更佳。 

 

 

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