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上海通蔚实业告诉大家:实验的常见问题解答
发布时间:2018-03-20   点击次数:1105次

上海通蔚实业生物科技有限企业提供试剂盒代测以及实验室外包服务,如果你想了解更多关于ELISA试剂盒实验的详细信息,来函!
 

抗原检测出的分子量比资料上的大,是怎么回事?
答:a)抗原形成了二聚体。增多巯基乙醇量,煮沸变性时间延长,可以打开二聚体。b)蛋白本身的修饰如:糖基化,磷酸化等
 

蛋白转移不到膜上,但胶上有,同时Marker 转上去了,为什么?
答:可能是:a)样品浓度过低;b)转移时间不够,。

要验证某个细胞上有无该蛋白的存在,需要做免疫组化和western blot试验吗?做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗?
答:①免疫组化可以用来进行定位,但是不能定量,而且有时会有假阳性,不易与背景区分;Western blot可以特异性检测某个蛋白质分子,进行定量,但是不能定位。
②两种实验的一抗有时候不能通用,企业的产品说明一般都会说明可以进行什么实验,在免疫组化时,是否适合石蜡切片或者冰冻切片。
 

细胞水平要做western blot,多少细胞提的蛋白够做western blot? 
答:一般5×10^6就足够了
 

同一样品能同时提RNA又提蛋白么?这样对western blot有无影响? 
答:能,没有问题。
 

同一蛋白样品能同时进行两种因子的Western Blot检测吗?
答:当然可以,有的甚至可以同时测几十种样品。
 

如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白,操作需要注意什么?
答:如果是膜蛋白和胞浆蛋白,所用的去垢剂要温和得多,这时加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。

 

我的样品的蛋白含量很低,每微升不到1微克,但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上,就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在,只是颜色变淡了,有什么办法可以解决?
答:你可以加大上样量,没有问题,还有转移时你可以用减少电流延长时间,加20%甲醇

 

 

上海通蔚生物科技有限企业

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