太阳2官方注册登录-太阳2娱乐登录地址

技术文章您现在的位置:太阳2官方注册登录 > 技术文章 > 枯草芽孢杆菌常用培养基的配制
枯草芽孢杆菌常用培养基的配制
发布时间:2011-05-05   点击次数:7629次

  枯草芽孢杆菌常用培养基的配制方法;

1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂

    枯草芽孢杆菌原生质体的制备 

    1 培养枯草芽孢杆菌 
取亲本菌株T4412、TT2 新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中,36℃振荡培养14 h,各取1 mL 菌液转接入装有20 mL 液体完全培养基的250 mL 锥形瓶中,36℃振荡培养 3 h,使细胞生长进入对数前期,各加入25 u/mL 青霉素,使其终浓度为0.3 u/mL,继续振荡培养2 h。 

    2. 收集细胞 
各取菌液10 mL,4000 r/min 离心10 min,弃上清液,将菌体悬浮于磷酸缓冲液中,离心。如此洗涤两次,将菌体悬浮10 mL SMM 中,每mL 约含108~109 活菌为宜。 

    3. 总菌数测定 
各取菌液0.5 mL,用生理盐水稀释,取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基,36℃培养24 h 后计数。此为未经酶处理的总菌数。 

    4. 脱壁 
    二株亲本菌株各取5 mL 菌悬液,加入5 mL 溶菌酶溶液,溶菌酶浓度为100 ug/mL,混匀后于36℃水浴保温处理30 min,定时取样,镜检观察原生质体形成情况,当95%以上细胞变成球状原生质体时,用4000 r/min 离心10 min,弃上清液,用高渗缓冲液洗涤除酶,然后将原生质体悬浮于5 mL 高渗缓冲液中。马上进行剩余菌数的测定。 

    5. 剩余菌数测定 
    取0.5 mL 上述原生质体悬液,用无菌水稀释,使原生质体裂解死亡,取10-2、10-3、10-4 稀释液各0.1 mL,涂布于完全培养基平板上,36℃培养24~48 h,生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。 
    计算酶处理后剩余细胞数,并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率=未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。

上海通蔚生物科技有限企业

上海通蔚生物科技有限企业

地址:上海市金山区枫泾镇环东一路65弄2号3463室

主营产品:ELISA检测试剂盒,ELISA试剂盒,酶联免疫试剂盒,人ELISA试剂盒,大鼠ELISA试剂盒,小鼠ELISA试剂盒,豚鼠ELISA试剂盒,兔ELISA试剂盒,羊ELISA试剂盒,牛ELISA试剂盒,鸡ELISA试剂盒,鸭ELISA试剂盒

©2019 版权所有:上海通蔚生物科技有限企业  备案号:站点地图  技术支撑:环保在线  管理登陆

QQ在线客服
  • 客服在线
联系方式

021-66980655

021-66980655

太阳2官方注册登录|太阳2娱乐登录地址

XML 地图 | Sitemap 地图
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站