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酶标记抗体法染色的基本原理
发布时间:2011-12-07   点击次数:624次

 酶标记抗体法和荧光素标记抗体法的原理类似,分为直接法和间接法,其原理基本相同,但敏感性不同。

(一)直接法

直接法是将酶(如HRP)标记在特异性抗体(*抗体)上,然后用酶标记抗体直接与相应原特异性结合,形成抗原—抗体—HRP复合物,zui后用酶底物DAB-H202显色。该法的优点是简单、步骤少,省时、特异性高、非特异性染色轻:缺点是敏感性差,因为一个抗原决定簇只结合一个HRP分子(假设一个抗体分子与一个HRP分子结合)。另外,一种标记抗体也只能检测一种抗原。若要检测多种抗原,就必须标记每一种特异抗体,这样既麻烦又不经济。目前此法很少应用,但在单克隆抗体制备过程中,为了更特异地筛选单抗,仍常用此法。

(二)间接法

间接法也称夹心法,是直接法的简单改进,将酶示踪物标记在二抗上,再与*抗体(已与相应抗原反应形成复合物的IgG)反应,然后进行显色反应。此法要求第二抗体与特异性抗体(一抗)应是不同种属的动物产生,如特异性抗体(一抗)是兔抗人IgG,酶标记抗体(二抗)则可以是羊抗兔抗体。该法与直接法比较有以下优点:

①应用面较宽,仅标记一种二抗就可以检测众多相同的*抗体,例如众多一抗为兔来源,只要标记一种抗兔二抗就可用于所有抗兔一抗的检测,不需要对每种特异性抗体进行标记;
②敏感性增加,*抗体的工作浓度在直接法的基础上进一步稀释;
③可以商品化购置;
④可以设计各种对照。

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