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ELISA检测试剂盒免疫测定的夹心法
发布时间:2015-05-18   点击次数:397次

    一般均采用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度迅速平衡。为避免蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA检测试剂盒板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性良好的材料如金属等,在盒底垫湿的纱布,zui后将ELISA检测试剂盒板放在湿纱布上。湿盒应先放在保温箱中预温至规定的温度,特别是在气温较低的时候更应如此。

    无论是水浴还是湿盒温育,反应板均不宜叠放,以保证各板的温度都能迅速平衡。室温温育的反应,操作时的室温应严格限制在规定的范围内,标准室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的要求控制温育。室温温育时,ELISA检测试剂盒板只要平置于操作台上即可。应注意温育的温度和时间应按规定力求准确。为保证这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定。ELISA检测试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有zui贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA检测试剂盒反应总是需要一定时间的温育。 
     温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射中多使反应在冰箱中过夜,以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA检测试剂盒中一般不予采用。

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